Template DNA有突變狀況(SNP、insertion、deletion)


 

狀況描述

  • 序列中出現單一鹼基有雙重訊號。
  • 所有波峰都很乾淨,卻在某個地方出現兩個重疊波峰。

發生的可能原因

  • PCR DNA發生突變。
  • 在做cloning時,DNA發生突變,特別是plasmid construct對細菌有毒性。

解決方式

  • 假如template DNA是heterozygous時,將PCR產物先接合到vector上再定序。
  • 假設plasmid construct對細菌有毒性,試著換個low copy number的vector,或改用其他strain的勝任細胞。
  • 用另外一端primer定序。